武(wu)漢大(da)學(xue)黎(li)威(wei)教授(shou)課題(ti)組(zu)：具(ju)有長(chang)效(xiao)抗菌(jun)效(xiao)果(guo)的活(huo)性益生(sheng)菌(jun)微針貼片

傷口感(gan)染(ran)是(shi)指傷(shang)口(kou)在(zai)愈(yu)合(he)過程(cheng)中(zhong)仍(reng)被細(xi)菌(jun)或其(qi)他(ta)微(wei)生物(wu)感(gan)染(ran)的疾病。與(yu)急(ji)性傷口(kou)不同(tong)，慢(man)性感(gan)染(ran)性傷口(kou)通(tong)常經歷較長時間的愈(yu)合(he)過程(cheng)或無法愈(yu)合，給(gei)患者帶(dai)來(lai)了嚴重的後果(guo)和沈(chen)重的負(fu)擔(dan)。傳(chuan)統(tong)上(shang)，感(gan)染(ran)傷口的治(zhi)療方(fang)法主(zhu)要包括(kuo)定(ding)期(qi)傷口(kou)清(qing)創(chuang)、口(kou)服抗生素、抗菌(jun)敷料(liao)等(deng)。但(dan)是(shi)這(zhe)些方法都(dou)有壹(yi)定(ding)的局(ju)限(xian)，首先，細菌(jun)在(zai)傷(shang)口(kou)部(bu)位產(chan)生的生(sheng)物(wu)膜形成(cheng)物(wu)理屏(ping)障(zhang)，限制抗菌(jun)劑或生(sheng)物(wu)大(da)分子滲(shen)透到深(shen)部(bu)組織，從而(er)顯著(zhu)降(jiang)低(di)藥(yao)物(wu)遞送效(xiao)率(lv)；其(qi)次(ci)，抗生素的誤(wu)用(yong)和過度(du)使(shi)用(yong)是(shi)增(zeng)加抗生素耐藥(yao)性風險的主(zhu)要驅(qu)動因素(su)，抗生素耐藥(yao)性已(yi)成(cheng)為嚴(yan)重的全(quan)球健(jian)康(kang)問(wen)題(ti)；此外，頻繁(fan)更換(huan)敷(fu)料，可能(neng)會導致傷口(kou)疼痛(tong)和繼發性損(sun)傷(shang)，從而顯著(zhu)降(jiang)低(di)患者的依(yi)從性。因此，非常需要研(yan)發壹(yi)種(zhong)新的傷(shang)口(kou)愈合(he)治(zhi)療策略。

基(ji)於(yu)此，武漢大(da)學(xue)藥(yao)學(xue)院黎(li)威(wei)教授(shou)團隊(dui)設(she)計開(kai)發了壹(yi)種(zhong)具(ju)有長(chang)效(xiao)抗菌(jun)效(xiao)果(guo)的活(huo)性益生(sheng)菌(jun)微針貼片，用(yong)於(yu)治(zhi)療慢(man)性感(gan)染(ran)傷口。該(gai)微(wei)針貼片是(shi)利用(yong)摩方(fang)精密(mi) microArch® S240 （精(jing)度(du)：10μm）3D打印設(she)備加工(gong)模(mo)具(ju)後經(jing)PDMS翻(fan)模(mo)制備而成(cheng)，相關(guan)研(yan)究成(cheng)果(guo)以(yi)“Accelerated infected wound healing by probiotic-based living microneedles with long-acting antibacterial effect"為題(ti)發表(biao)在(zai)期(qi)刊(kan)《Bioactive Materials》上(shang)。武漢大(da)學(xue)藥(yao)學(xue)院碩(shuo)士研(yan)究生(sheng)靳(jin)銀麗(li)、武漢大(da)學(xue)中(zhong)南醫(yi)院藥(yao)劑科(ke)盧(lu)雲、武漢大(da)學(xue)藥(yao)學(xue)院博士研(yan)究生(sheng)江雪為共(gong)同第(di)壹(yi)作(zuo)者，武(wu)漢大(da)學(xue)藥(yao)學(xue)院黎(li)威(wei)教授(shou)、武漢大(da)學(xue)中(zhong)南醫(yi)院整(zheng)形美(mei)容(rong)科(ke)郭(guo)亮(liang)主任醫(yi)師(shi)為共(gong)同通(tong)訊(xun)作(zuo)者。

該(gai)微針貼片（5% GL MN）由(you)聚乙(yi)烯(xi)醇(chun)（PVA）、蔗(zhe)糖、5%甘油和羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)制成(cheng)。其(qi)中(zhong)，PVA-蔗(zhe)糖基(ji)質(zhi)為5% GL MN提(ti)供足(zu)夠的機械強度(du)，促進5% GL MN在(zai)插(cha)入皮(pi)膚(fu)後快(kuai)速溶(rong)解，從(cong)而(er)實現羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)的快(kuai)速(su)遞送；羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)可以(yi)代(dai)謝甘(gan)油產(chan)生具(ju)有抗菌(jun)作(zuo)用(yong)的羅(luo)氏(shi)菌(jun)素，從(cong)而(er)在(zai)慢(man)性感(gan)染(ran)傷口處(chu)實現抗菌(jun)、減少(shao)炎癥、促進傷口(kou)愈合(he)的作(zuo)用(yong)。值(zhi)得註意的是(shi)，在(zai)5% GL MN中(zhong)加入的甘(gan)油不僅(jin)不影(ying)響羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)的存活(huo)，而(er)且(qie)還(hai)為羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)持續(xu)產(chan)生羅(luo)氏(shi)菌(jun)素提(ti)供了充(chong)分來(lai)源(yuan)，從而(er)在(zai)傷(shang)口(kou)深(shen)處(chu)實現長效(xiao)抗菌(jun)和抗炎作(zuo)用(yong)。

圖1.用(yong)於(yu)慢性感(gan)染(ran)傷口愈(yu)合(he)的5% GL MN示(shi)意(yi)圖(tu)。（a）含有羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)的5% GL MN示(shi)意(yi)圖(tu)。（b）羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)具(ju)有抗菌(jun)和抗炎作(zuo)用(yong)的工(gong)作(zuo)機理。（c）5% GL MN具(ju)有長(chang)效(xiao)抗菌(jun)作(zuo)用(yong)，可加(jia)速感(gan)染(ran)傷口愈(yu)合(he)。

首先采用(yong)真(zhen)空(kong)輔(fu)助微(wei)成(cheng)型(xing)方法制(zhi)備GL MNs 貼片，並(bing)對(dui)微(wei)針的形貌(mao)、機械強度(du)、穿刺皮(pi)膚(fu)的能(neng)力、溶(rong)解速(su)度(du)以及釋藥(yao)效(xiao)率(lv)等(deng)進行壹(yi)系(xi)列表(biao)征(zheng)。

圖(tu)2. GL MNs貼片的制(zhi)造(zao)和表(biao)征(zheng)。（a）GL MNs貼片的制(zhi)作(zuo)過程(cheng)示(shi)意(yi)圖(tu)。（b）具(ju)有不同(tong)甘(gan)油濃度(du)的GL MNs 貼片的代(dai)表(biao)性明(ming)場(chang)顯(xian)微(wei)鏡(jing)圖像。（c）分別含有0%、2.5 %和5 %甘油的GL MNs 貼片的力(li)-位(wei)移曲(qu)線。（d）GL MNs 貼片插(cha)入豬(zhu)皮(pi)膚(fu)後的代(dai)表(biao)性明(ming)場(chang)和熒(ying)光(guang)顯微鏡(jing)圖像。（e）施用(yong)GL MNs貼片後豬(zhu)皮(pi)膚(fu)的組(zu)織學(xue)切(qie)片(pian)圖像。（f）GL MNs貼片施(shi)用(yong)於(yu)豬皮(pi)膚(fu)後不同(tong)時(shi)間(jian)的代(dai)表(biao)性明(ming)場(chang)顯(xian)微(wei)鏡(jing)圖像。（g）施用(yong)於(yu)豬皮(pi)後殘(can)留微(wei)針長度(du)的定(ding)量(liang)分析。（h）GL MNs 貼片在(zai)PBS中(zhong)的累積(ji)藥(yao)物(wu)釋放(fang)。每個點代表(biao)平均值(zhi)±SD（n = 3），***P < 0.001。

制備的GL MNs 貼片結構(gou)為基(ji)底(di)半(ban)徑(jing)200 μm，高(gao)度(du)850 μm，尖部(bu)半(ban)徑(jing)∼10 μm的錐(zhui)形，微(wei)針排(pai)列成(cheng)10×10陣列，面(mian)積(ji)為7 mm×7 mm。羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)以良好的形態(tai)封(feng)裝在(zai)微(wei)針內。液相色(se)譜(pu)-質(zhi)譜(pu)聯(lian)用(yong)（LC-MS）結果(guo)顯(xian)示(shi)，羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)產(chan)生的物(wu)質(zhi)中(zhong)存在(zai)與(yu)3-羥(qiang)基(ji)丙(bing)醛(quan)（3-HPA）相對(dui)應的分子離子(zi)峰(feng)（M=74.0607），這(zhe)表(biao)明(ming)羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)具(ju)有產(chan)生抗菌(jun)物(wu)質(zhi)羅(luo)氏(shi)菌(jun)素的能(neng)力。定量(liang)分析表(biao)明(ming)，5 % GL MNs 中(zhong)的羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)能(neng)產(chan)生更多的羅(luo)氏(shi)菌(jun)素。而(er)羅(luo)氏(shi)菌(jun)素可(ke)以(yi)引(yin)起大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)、金黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)和銅綠(lv)假單胞桿(gan)菌(jun)的顯(xian)著(zhu)形態(tai)變化(hua)，據推測，羅(luo)氏(shi)菌(jun)素通(tong)過抑(yi)制(zhi)細菌(jun)核糖核苷(gan)酸(suan)還(hai)原(yuan)酶的活(huo)性，而核(he)糖核苷(gan)酸(suan)還(hai)原(yuan)酶對(dui)DNA合(he)成至關(guan)重要，從(cong)而實現廣譜(pu)抗菌(jun)活性。

圖3. 5% GL MN 貼片的表(biao)征(zheng)和羅(luo)氏(shi)菌(jun)素的抗菌(jun)作(zuo)用(yong)。（a）5% GL MN 貼片（b）5% GL MN貼片單(dan)根針的橫(heng)截面和（c）從5% GL MN 貼片中(zhong)提(ti)取(qu)的羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)的FESEM圖(tu)像，（b）中(zhong)的黃(huang)色(se)箭(jian)頭表(biao)示(shi)微(wei)針中(zhong)存在(zai)羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)。（d）對(dui)5% GL MN 貼片中(zhong)羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)產(chan)生的羅(luo)氏(shi)菌(jun)素的LC-MS分析。（e）含有不同(tong)濃度(du)甘油的GL MNs貼片產(chan)生羅(luo)氏(shi)菌(jun)素的定(ding)量(liang)分析。（f）大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)、金黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)和銅綠(lv)假單胞桿(gan)菌(jun)用(yong)羅(luo)氏(shi)菌(jun)素治(zhi)療後形態(tai)的代(dai)表(biao)性FESEM圖像。每個點表(biao)示(shi)平均值(zhi)± SD（n = 3），*P < 0.05，***P < 0.001。

隨(sui)後，為了進壹(yi)步(bu)評估5% GL MN貼片的抗菌(jun)效(xiao)果(guo)，通(tong)過細(xi)菌(jun)的活(huo)死染色(se)實驗(yan)、平板塗布和抑菌(jun)圈實驗(yan)來(lai)驗(yan)證(zheng)5% GL MN貼片具(ju)有良好的抗菌(jun)效(xiao)果(guo)。此外，5 % GL MN貼片在(zai)體(ti)外也(ye)顯(xian)示(shi)出(chu)有(you)效(xiao)的金(jin)黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)生物(wu)膜清(qing)除率(lv)，這(zhe)通(tong)常在(zai)有(you)害細(xi)菌(jun)的耐藥(yao)性中(zhong)起關(guan)鍵作(zuo)用(yong)。

圖4. 5% GL MN貼片在(zai)體(ti)外的抗菌(jun)作(zuo)用(yong)。（a）金黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)與(yu)GL MNs貼片孵(fu)育(yu)24小時(shi)後的活(huo)/死測定(ding)。（b）GL MNs貼片處(chu)理後大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)、金黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)和銅綠(lv)假單胞桿(gan)菌(jun)的細(xi)菌(jun)死亡率(lv)。（c） LB瓊脂平板的代(dai)表(biao)性明(ming)場(chang)圖(tu)像，顯示(shi)大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)、金黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)和銅綠(lv)假單胞桿(gan)菌(jun)在(zai)與(yu)不同(tong)GL MNs貼片孵(fu)育(yu)24小時(shi)後的生(sheng)長(chang)情況(kuang)。（d）接(jie)受不同(tong)GL MNs貼片處(chu)理24小(xiao)時後LB液體(ti)培養基(ji)中(zhong)大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)，金黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)或銅(tong)綠(lv)假單胞桿(gan)菌(jun)的OD600值(zhi)。（e）不同(tong)GL MNs貼片處(chu)理24小(xiao)時對(dui)大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)，金黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)或銅(tong)綠(lv)假單胞桿(gan)菌(jun)抑制(zhi)區(qu)的代(dai)表(biao)性明(ming)場(chang)圖(tu)像。紅色(se)虛線(xian)圓圈(quan)表(biao)示(shi)對(dui)藥(yao)敏(min)片(pian)的位(wei)置(zhi)，黑(hei)色(se)虛線(xian)圓圈(quan)表(biao)示(shi)抑(yi)制(zhi)區(qu)。（f）對(dui)大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)、金黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)或銅(tong)綠(lv)假單胞桿(gan)菌(jun)的抑(yi)制(zhi)區的直(zhi)徑(jing)。每個點代表(biao)平均值(zhi)±SD（n = 3），***P < 0.001。ns 表(biao)示(shi)無顯(xian)著(zhu)性差異(yi)。

圖(tu)5. 5% GL MN貼片體(ti)外的生(sheng)物(wu)膜清(qing)除效(xiao)果(guo)。（a）金(jin)黃色(se)葡萄球菌(jun)接(jie)受不同(tong)治(zhi)療後的共(gong)聚(ju)焦激(ji)光掃(sao)描顯微(wei)鏡(jing)圖像。綠(lv)色(se)：活細(xi)菌(jun)。（b）不同(tong)微(wei)針處(chu)理後用(yong)結晶(jing)紫染(ran)色(se)的生(sheng)物(wu)膜圖像。（c）金黃色(se)葡萄球菌(jun)在(zai)（a）中(zhong)接(jie)受不同(tong)處(chu)理後的生(sheng)物(wu)膜清(qing)除率(lv)。（d）金黃色(se)葡萄球菌(jun)在(zai)（b）中(zhong)用(yong)不同(tong)微(wei)針處(chu)理後的生(sheng)物(wu)膜清(qing)除率(lv)。每個點表(biao)示(shi)的平均值(zhi)±SD（n = 3）。*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001。ns 表(biao)示(shi)無顯(xian)著(zhu)性差異(yi)。

緊(jin)接(jie)著，通(tong)過流(liu)式(shi)細(xi)胞術(shu)、實時定(ding)量(liang)聚合(he)酶鏈(lian)反(fan)應（qPCR）、蛋白質(zhi)印跡(ji)（WB）驗(yan)證(zheng)了基(ji)於(yu)羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)GL MNs貼片的抗炎作(zuo)用(yong)。

圖6. 體(ti)外GL MNs貼片的抗炎特性。（a）流(liu)式(shi)細(xi)胞術(shu)分析不同(tong)組(zu)的RAW 264.7的細(xi)胞內CD86的熒(ying)光(guang)強度(du)。（b）不同(tong)組(zu)的流(liu)式(shi)細(xi)胞術(shu)直方圖(tu)。（c）不同(tong)組(zu)的CD86相對(dui)表(biao)達(da)水(shui)平。（d-e）不同(tong)處(chu)理後通(tong)過qPCR測(ce)定(ding)RAW 264.7細胞中(zhong)IL-6和TNF-α的表(biao)達(da)水(shui)平。（f-h）不同(tong)處(chu)理後通(tong)過蛋白質(zhi)印跡(ji)法測(ce)定RAW 264.7細(xi)胞中(zhong)IL-6和TNF-α的表(biao)達(da)水(shui)平。每個點表(biao)示(shi)平均值(zhi)±SD（n = 3），*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001。

基(ji)於(yu)GL MNs貼片的形態(tai)、皮(pi)膚(fu)穿透能(neng)力、機械強度(du)、溶(rong)解速(su)度(du)和抗菌(jun)功效(xiao)等(deng)方(fang)面(mian)的表(biao)征(zheng)，確定5 % GL MN是(shi)遞送羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)到傷(shang)口(kou)處(chu)進行抗菌(jun)的最(zui)佳(jia)方(fang)案(an)。之後，細(xi)胞活(huo)死染色(se)實驗(yan)及細胞溶(rong)血(xue)實驗(yan)證(zheng)明(ming)了5% GL MN貼片在(zai)體(ti)外具(ju)有優(you)異(yi)的生(sheng)物(wu)相容性。羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)在(zai)5% GL MN貼片中(zhong)的穩(wen)定性對(dui)於(yu)維持其(qi)抗菌(jun)活性至關(guan)重要，將(jiang)5% GL MN貼片在(zai)4℃和25℃下(xia)分別保存，羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)可(ke)在(zai)5% GL MN貼片中(zhong)存活(huo)7天(tian)，超(chao)過40%的活(huo)菌(jun)保留(liu)在(zai)貼片中(zhong)；將貼片置(zhi)於(yu)4℃時，羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)在(zai)60天(tian)後仍(reng)保持(chi)高(gao)活(huo)力(li)（>80%），這(zhe)表(biao)明(ming)羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)在(zai)5% GL MN貼片中(zhong)具(ju)有長(chang)期(qi)穩(wen)定性。

圖7. 5% GL MN貼片的細(xi)胞毒(du)性和穩(wen)定性。（a）接(jie)受不同(tong)處(chu)理後NIH-3T3細(xi)胞的活(huo)/死測定(ding)。（b） 接(jie)受不同(tong)處(chu)理後 NIH-3T3 細(xi)胞和 HUVEC 細胞的活(huo)力(li)分析。MRS瓊脂平板的明(ming)場(chang)圖(tu)像顯示(shi)0%和5% GL MN貼片中(zhong)羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)在(zai)25℃（c）或4℃（e）下(xia)儲(chu)存時(shi)細(xi)菌(jun)活力(li)隨(sui)時間(jian)變(bian)化情況(kuang)。在(zai)25℃（d）或4℃（f）下(xia)儲(chu)存不同(tong)時(shi)間(jian)後，0%和5% GL MN貼片中(zhong)羅(luo)伊(yi)氏(shi)乳(ru)桿(gan)菌(jun)的菌(jun)落(luo)計數(shu)。每個點表(biao)示(shi)平均值(zhi)±SD（n = 3）。

然後，在(zai)小(xiao)鼠(shu)身(shen)上(shang)建立(li)全層皮(pi)膚(fu)傷(shang)口(kou)模(mo)型，將(jiang)5% GL MN貼片施(shi)用(yong)於(yu)傷口處(chu)，可以(yi)看到5% GL MN貼片可(ke)以促(cu)進傷口(kou)的愈(yu)合(he)，並(bing)且對(dui)傷(shang)口處(chu)的金(jin)黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)有持(chi)續(xu)的抑(yi)制(zhi)作(zuo)用(yong)。

圖8. 5% GL MN貼片在(zai)體(ti)內的抗菌(jun)作(zuo)用(yong)。（a）體(ti)內實驗(yan)的時(shi)間(jian)方案(an)。（b）小鼠接(jie)受不同(tong)治(zhi)療後第(di)0、3、5、7、9天(tian)皮(pi)膚(fu)傷(shang)口(kou)的代(dai)表(biao)性圖片(pian)。黑色(se)虛線(xian)圓圈(quan)表(biao)示(shi)原(yuan)始傷口(kou)區域(yu)（直徑(jing)：1厘(li)米(mi)）。（c）9天(tian)內不同(tong)組(zu)的傷(shang)口(kou)形態(tai)變化(hua)示(shi)意(yi)圖(tu)。（d）不同(tong)組(zu)在(zai)第(di) 0、3、5、7和9天(tian)從傷(shang)口組(zu)織中(zhong)分離出(chu)的金(jin)黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)菌(jun)落(luo)的代(dai)表(biao)性圖像。（e）不同(tong)處(chu)理的小(xiao)鼠(shu)皮(pi)膚(fu)傷(shang)口(kou)剩(sheng)余(yu)面積(ji)比(bi)例-時間(jian)曲(qu)線(xian)。（f）不同(tong)組(zu)在(zai)第(di) 0、3、5、7 和9天(tian)從傷(shang)口組(zu)織中(zhong)分離的金(jin)黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)菌(jun)落(luo)計數(shu)。（g）小鼠接(jie)受不同(tong)治(zhi)療後的體(ti)重變化。每個點表(biao)示(shi)平均值(zhi)±SD（n = 7），*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001。ns表(biao)示(shi)無顯(xian)著(zhu)性差異(yi)。

最(zui)後，對(dui)小(xiao)鼠傷(shang)口(kou)處(chu)皮(pi)膚(fu)進行病理學(xue)切(qie)片(pian)染色(se)，H&E、Masson、IL-6、CD31染色(se)表(biao)明(ming)，5% GL MN貼片具(ju)有良好的促(cu)進傷口(kou)愈合(he)、減少炎癥反(fan)應、促進血(xue)管(guan)生成(cheng)的作(zuo)用(yong)。

圖9. 不同(tong)治(zhi)療後的組(zu)織再(zai)生、炎癥反(fan)應和血(xue)管(guan)生成(cheng)。第(di)9天(tian)不同(tong)處(chu)理後（a）H&E染(ran)色(se)（b）Masson染色(se)和（c）IL-6免疫(yi)組化(hua)染(ran)色(se)的代(dai)表(biao)性明(ming)場(chang)顯(xian)微(wei)圖(tu)像。（a）中(zhong)的藍(lan)色(se)箭(jian)頭表(biao)示(shi)傷(shang)口(kou)長(chang)度(du)，黑色(se)箭(jian)頭表(biao)示(shi)傷(shang)口(kou)厚(hou)度(du)。（d）在(zai)第(di)9天(tian)不同(tong)治(zhi)療後用(yong)CD31（紅色(se)）和DAPI（藍(lan)色(se)）染色(se)後傷(shang)口組(zu)織新生血(xue)管(guan)形成(cheng)的免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)圖像。第(di)9天(tian)不同(tong)治(zhi)療組(zu)的H&E染(ran)色(se)顯示(shi)的傷(shang)口(kou)長度(du)（e）和傷口(kou)厚度(du)（f）分析。（g）第(di)9天(tian)不同(tong)治(zhi)療組(zu)的膠(jiao)原(yuan)蛋白體(ti)積(ji)分數(shu)（CVF）。（h）在(zai)第(di)9天(tian)不同(tong)治(zhi)療組(zu)IL-6的陽(yang)性細胞數(shu)。（i）第(di)9天(tian)不同(tong)治(zhi)療的CD31陽(yang)性細胞數(shu)。每個點表(biao)示(shi)平均值(zhi)±SD（n = 7），*P < 0.05，**P < 0.01，***P < 0.001。

結論(lun)：綜上(shang)，研(yan)究團(tuan)隊開發了壹(yi)種(zhong)新型且(qie)生物(wu)相容性良好的益(yi)生(sheng)菌(jun)微針貼片，具(ju)有長(chang)效(xiao)抗菌(jun)作(zuo)用(yong)，可促(cu)進感(gan)染(ran)傷口的愈(yu)合(he)。微針貼片為益(yi)生菌(jun)提(ti)供了良好的保(bao)護(hu)，在(zai)4℃下(xia)，它(ta)在(zai)微(wei)針貼片內保持(chi)高(gao)達(da)80%的活(huo)力(li)超(chao)過60天(tian)。插入皮(pi)膚(fu)後，微(wei)針貼片迅(xun)速(su)溶(rong)解並(bing)實現益生(sheng)菌(jun)在(zai)深(shen)層傷口組(zu)織中(zhong)的快(kuai)速(su)遞送，益生(sheng)菌(jun)能(neng)夠在(zai)傷(shang)口(kou)中(zhong)存活(huo)約(yue)壹(yi)周，並(bing)不斷(duan)將(jiang)共(gong)同遞(di)送的甘(gan)油轉化為抗菌(jun)物(wu)質(zhi)，從(cong)而在(zai)感(gan)染(ran)的傷(shang)口(kou)中(zhong)實現長效(xiao)抗菌(jun)作(zuo)用(yong)。在(zai)金(jin)黃(huang)色(se)葡萄球菌(jun)感(gan)染(ran)傷口的小(xiao)鼠(shu)模(mo)型中(zhong)，與(yu)對(dui)照(zhao)組相比(bi)，壹(yi)次(ci)施用(yong)益生(sheng)菌(jun)微針貼劑在(zai)消除(chu)有(you)害細(xi)菌(jun)和促進傷口(kou)閉合(he)方面表(biao)現出更好的效(xiao)果(guo)，同(tong)時減少(shao)炎癥、增(zeng)強組織再(zai)生和血(xue)管(guan)生成(cheng)，這(zhe)對(dui)慢(man)性感(gan)染(ran)傷口的治(zhi)療具(ju)有巨(ju)大(da)潛(qian)力(li)。