揭(jie)秘(mi)多(duo)功(gong)能微針貼片：壹氧化(hua)氮釋(shi)放納(na)米載體(ti)助(zhu)力慢性(xing)傷(shang)口靶向治療(liao)

慢(man)性(xing)皮膚傷(shang)口，如糖(tang)尿(niao)病足(zu)潰(kui)瘍(yang)、靜(jing)脈(mai)相關潰(kui)瘍(yang)和(he)難以(yi)愈合的(de)手術(shu)傷口，正在影響著(zhe)美(mei)國超(chao)過(guo)1050萬人(ren)的健(jian)康(kang)，並(bing)導(dao)致(zhi)巨額的醫療(liao)保健(jian)開(kai)支(zhi)，據估(gu)計，每年的(de)費(fei)用(yong)高(gao)達(da)250億美(mei)元(yuan)以(yi)上。此(ci)外(wai)，由於(yu)免疫(yi)反(fan)應(ying)受損(sun)，慢(man)性(xing)傷(shang)口特別(bie)容(rong)易受到(dao)細菌(jun)感染(ran)，例(li)如(ru)金黃(huang)色葡(pu)萄球(qiu)菌(jun)（S. aureus），這(zhe)會(hui)進(jin)壹步(bu)加(jia)重(zhong)患者的病(bing)情。據報道，與慢(man)性(xing)傷(shang)口相關的疾(ji)病，5年死亡(wang)率(lv)甚(shen)至(zhi)超(chao)過(guo)50%，這壹數(shu)據與心力衰竭(jie)的(de)死亡(wang)率(lv)相當，顯著體(ti)現(xian)了(le)慢(man)性(xing)皮膚傷(shang)口對患(huan)者(zhe)健康(kang)和(he)醫療(liao)保健(jian)系統帶來的(de)巨大負(fu)擔。

針(zhen)對不(bu)愈合的(de)皮膚傷(shang)口，目前(qian)已經研(yan)發了多種(zhong)治療(liao)方法(fa)，包括(kuo)局部清潔消毒(du)、口服抗(kang)生(sheng)素(su)，傷口清創(chuang)、抗(kang)菌敷(fu)料，以(yi)及物理抗菌(jun)療(liao)法(fa)，如激(ji)光應(ying)用(yong)。盡(jin)管在治療(liao)方式(shi)取得(de)了壹些(xie)進(jin)展，但(dan)這(zhe)些(xie)方法(fa)仍(reng)然(ran)存(cun)在壹些(xie)缺點。例(li)如(ru)，通(tong)常在傷(shang)口組織(zhi)中(zhong)形成(cheng)的(de)細(xi)菌(jun)生(sheng)物膜(mo)可當做物理屏障，它阻礙了(le)抗生素(su)或其他(ta)藥物穿(chuan)透(tou)深(shen)部病變(bian)，從而(er)顯(xian)著(zhe)降(jiang)低治療(liao)效果。另(ling)外(wai)，長期(qi)使用(yong)或濫(lan)用(yong)抗(kang)生(sheng)素(su)會(hui)導(dao)致(zhi)細(xi)菌產生耐(nai)藥性(xing)，這(zhe)使(shi)得(de)皮膚傷(shang)口治療(liao)更(geng)加(jia)困(kun)難和復(fu)雜。同時(shi)，傷(shang)口清創(chuang)和(he)更換(huan)敷(fu)料等(deng)侵(qin)入性(xing)操(cao)作(zuo)很可能(neng)會(hui)對(dui)傷(shang)口造成(cheng)二(er)次傷害的(de)風險。為(wei)了應(ying)對這(zhe)些(xie)挑(tiao)戰(zhan)，最(zui)近(jin)的研(yan)究(jiu)探索了具有非侵(qin)入性(xing)特性(xing)和(he)改(gai)進(jin)生物膜(mo)滲透(tou)能力的納(na)米配(pei)方，旨在通(tong)過抗菌和抗炎(yan)作用(yong)促(cu)進(jin)慢性(xing)傷(shang)口愈合。然(ran)而(er)，這(zhe)些(xie)基(ji)於(yu)納米(mi)技(ji)術(shu)的系統往往缺乏(fa)靶(ba)向能力或無法(fa)實現(xian)長期(qi)的協同效應(ying)，從而(er)影響了它(ta)們的(de)治療(liao)效果。因此(ci)，需要(yao)構建(jian)壹種(zhong)通(tong)過靶向和協同療(liao)法(fa)加(jia)速慢性(xing)傷(shang)口愈合的(de)新策(ce)略(lve)。

基(ji)於(yu)此(ci)，武(wu)漢大學(xue)藥學(xue)院(yuan)黎(li)威教授(shou)團隊設計開(kai)發了壹種(zhong)裝(zhuang)載工(gong)程(cheng)壹氧化(hua)氮釋(shi)放納(na)米載體(ti)的(de)多(duo)功(gong)能微針貼片用(yong)於(yu)慢性(xing)傷(shang)口的靶(ba)向和協同治療(liao)。相關研(yan)究(jiu)成(cheng)果以(yi)“Multifunctional Microneedle Patches Loaded With Engineered Nitric Oxide-Releasing Nanocarriers for Targeted and Synergistic Chronic Wound Therapy"為(wei)題發表在期(qi)刊《Advanced Materials》上。武漢大學(xue)藥學(xue)院(yuan)碩士(shi)研(yan)究(jiu)生靳(jin)銀(yin)麗(li)、武漢(han)大學(xue)同仁(ren)醫院(yuan)（武(wu)漢市第(di)三(san)人(ren)民醫院(yuan)）燒傷(shang)科副(fu)主(zhu)任醫師(shi)劉(liu)淑(shu)華為(wei)共同第(di)壹作者(zhe)，武(wu)漢大學(xue)藥學(xue)院(yuan)黎(li)威教授(shou)、武漢大學(xue)同仁(ren)醫院(yuan)（武(wu)漢市第(di)三(san)人(ren)民醫院(yuan)）阮(ruan)瓊芳教授(shou)為(wei)共同通(tong)訊(xun)作者(zhe)。

該(gai)微針貼片（RE@SA-Con A/SNO MNs）是利用(yong)摩(mo)方精密(mi) microArch® S240 （精度：10 μm）3D打印設備加(jia)工(gong)模(mo)具後經PDMS翻模(mo)制備而(er)成(cheng)的(de)，由聚(ju)乙(yi)烯(xi)醇(chun)（PVA）、蔗糖、RE@SA-Con A/SNO納(na)米(mi)粒子(zi)制(zhi)成(cheng)。RE@SA-Con A/SNO NPs修飾有刀豆球(qiu)蛋(dan)白A（Con A）和(he)NO分子(zi)並(bing)裝(zhuang)載抗(kang)菌(jun)物質羅氏菌(jun)素(su)（Reuterin）。在MNs的(de)幫(bang)助(zhu)下，納(na)米顆粒（NPs）可以(yi)直接(jie)穿(chuan)過(guo)細菌生物膜(mo)並高(gao)效遞送(song)到(dao)傷口組織(zhi)，通(tong)過Con A與細菌表面多(duo)糖之(zhi)間的特異(yi)性(xing)識(shi)別(bie)靶(ba)向有害細(xi)菌(jun)，然(ran)後(hou)釋(shi)放羅氏菌(jun)素(su)，從而(er)達(da)到(dao)有效的抗(kang)菌(jun)效果。此(ci)外(wai)，NPs在傷(shang)口組織(zhi)中(zhong)解離(li)時(shi)持(chi)續產(chan)生(sheng)NO，發揮(hui)強大的(de)抗炎(yan)作用(yong)，有(you)利(li)於(yu)組織(zhi)再生(sheng)，進(jin)壹步(bu)促(cu)進(jin)慢性(xing)傷(shang)口閉(bi)合(he)。因(yin)此(ci)，這(zhe)項工作(zuo)提(ti)供了壹種(zhong)新型(xing)微針貼片，其中(zhong)載有(you)工(gong)程(cheng)化(hua)納(na)米(mi)粒子(zi)，旨在通(tong)過靶向和協同治療(liao)加(jia)速慢性(xing)傷(shang)口愈合。

首(shou)先使(shi)用(yong)高(gao)碘(dian)酸(suan)鈉對(dui)海藻(zao)酸(suan)（SA）進(jin)行氧化(hua)形成(cheng)醛(quan)基(ji)化(hua)海藻(zao)酸(suan)鈉（ASA），隨(sui)後(hou)，將刀豆凝集(ji)素(su)A（Con A）與醛(quan)基(ji)修飾的SA偶(ou)聯形成(cheng)海藻(zao)酸(suan)-刀豆凝集(ji)素(su)A（SA-Con A）。同時(shi)，通(tong)過硫醇(chun)基(ji)的引(yin)入完成(cheng)了(le)NO的(de)修飾，先制(zhi)備硫醇(chun)功(gong)能化(hua)海藻(zao)酸(suan)（SA-SH），隨(sui)後(hou)，將NO與(yu)硫(liu)醇(chun)基(ji)偶(ou)聯，形成(cheng)壹氧化(hua)氮供體(ti)（SA-SNO）。RE@SA-Con A/SNO納(na)米(mi)顆粒通(tong)過海藻(zao)酸(suan)-刀豆凝集(ji)素(su)A（SA-Con A）與海藻(zao)酸(suan)-硝基(ji)化(hua)物（SA-SNO）在鈣(gai)離(li)子(zi)（Ca²⁺）的(de)交(jiao)聯作(zuo)用(yong)下合(he)成(cheng)。合(he)成(cheng)的(de)RE@SA-Con A/SNO納(na)米(mi)顆(ke)粒呈(cheng)球(qiu)形，通(tong)過動態光散射（DLS）測得(de)其粒徑為(wei)255.00 ± 0.33 nm。納米顆(ke)粒的包(bao)封(feng)效率為(wei)57.65±3.72%，藥物負載效率達(da)到(dao)21.09±1.33%。由於(yu)Ca²⁺的引(yin)入(ru)，顆(ke)粒的zeta電(dian)位上(shang)升(sheng)至(zhi)−0.23 ± 0.08 mV，表明顆粒分散均勻。隨(sui)後(hou)，進(jin)壹步(bu)分析(xi)了RE@SA-Con A/SNO納(na)米(mi)顆(ke)粒的藥物釋(shi)放性(xing)能(neng)。結(jie)果顯示，Reuterin可持(chi)續釋(shi)放長達(da)60小(xiao)時(shi)， NO可以(yi)實現(xian)約(yue)12小(xiao)時(shi)的持(chi)續釋(shi)放。這(zhe)些(xie)結(jie)果表明，RE@SA-Con A/SNO納米(mi)顆(ke)粒具有(you)同時(shi)長效釋(shi)放Reuterin和(he)NO的能(neng)力。

圖(tu)2. RE@SA-Con A/SNO NPs的(de)表征。a）RE@SA-Con A/SNO NPs的(de)合成(cheng)過(guo)程(cheng)示意(yi)圖(tu)。b） SA-ConA的(de)FTIR光(guang)譜(pu)。c）RE@SA-Con A/SNO NPs的(de)TEM圖(tu)像(xiang)。d）SA-SNO的(de)FTIR光(guang)譜(pu)。e）RE@SA-Con A/SNO NPs的動態光(guang)散射（DLS）。f）RE@SA-Con A/SNO NPs的封裝(zhuang)效率和(he)負(fu)載效率。g）RE@SA-Con A/SNO NPs的(de)Zeta電(dian)位。RE（h）和(he)NO（i）體(ti)外(wai)RE@SA-Con A/SNO NPs 的(de)累積(ji)釋(shi)放。每個(ge)點代(dai)表SD ±平均值（n = 3）。

然(ran)後(hou)，通(tong)過真(zhen)空輔助微成(cheng)型(xing)方法(fa)制備可溶性(xing)微針貼片，並將RE@SA-Con A/SNO NPs裝(zhuang)載到(dao)微針貼片（RE@SA-Con A/SNO MNs）中(zhong)。為(wei)便於(yu)觀察(cha)，用(yong)異(yi)硫(liu)氰(qing)酸(suan)熒光(guang)素(su)（FITC）標(biao)記(ji)納米(mi)顆粒。可以(yi)看出(chu)，微針排列為(wei)10×10陣列(lie)，熒光標(biao)記(ji)的納(na)米顆粒均勻分布於(yu)微針中(zhong)。這壹分布通(tong)過微針截面的(de)場(chang)發射掃(sao)描電子(zi)顯(xian)微鏡(jing)（FESEM）進(jin)壹步(bu)驗證(zheng)。每根(gen)微針呈(cheng)錐(zhui)形，高(gao)度為(wei)850 µm，底部直徑(jing)為(wei)400 µm，針間距為(wei)700 µm。微針貼片表現(xian)出(chu)良(liang)好(hao)的(de)機械(xie)強度（2.14±0.35 N），成(cheng)功(gong)刺入(ru)離體(ti)豬(zhu)皮膚而(er)未發生斷裂。微針在應(ying)用(yong)5分鐘後迅速溶解(jie)，實現(xian)了(le)納(na)米(mi)顆(ke)粒的高(gao)效遞送(song)。每片(pian)微針貼片中(zhong)納米(mi)顆(ke)粒的負(fu)載量為(wei)63.75±2.42 µg，刺入皮膚後(hou)納米(mi)顆粒的遞(di)送(song)效率達(da)到(dao)86.35±1.49%。此(ci)外(wai)，微針貼片體(ti)積(ji)小(xiao)巧(qiao)，便於(yu)穿(chuan)戴(dai)於(yu)足(zu)部或手部，用(yong)於(yu)治療(liao)應(ying)用(yong)。

RE@SA-Con A/SNO NPs的(de)靶(ba)向性(xing)能(neng)對(dui)微針貼片清除有(you)害細(xi)菌(jun)並(bing)促進(jin)創(chuang)傷(shang)愈合至(zhi)關重要(yao)。首(shou)先評(ping)估(gu)了RE@SA-Con A/SNO NPs在微針中(zhong)的靶(ba)向效率。經(jing)過(guo)與(yu)金(jin)黃(huang)色葡(pu)萄球(qiu)菌(jun)（S. aureus）共(gong)孵(fu)育(yu)12小(xiao)時(shi)後，FITC標(biao)記(ji)的RE@SA-Con A/SNO NPs能(neng)有效靶向並結(jie)合(he)於(yu)S. aureus表面，這(zhe)壹結果通(tong)過FESEM圖(tu)像(xiang)進(jin)壹步(bu)證(zheng)實。相比之(zhi)下，當將Con A蛋(dan)白替(ti)換(huan)為(wei)牛血(xue)清(qing)白蛋(dan)白（BSA）時(shi)，納米(mi)顆(ke)粒（RE@SA-BSA/SNO-FITC NPs）失去了靶向有害細(xi)菌(jun)的(de)能力。結果表明，RE@SA-Con A/SNO NPs的靶(ba)向能力來源(yuan)於(yu)Con A與細(xi)菌(jun)表面甘(gan)露(lu)糖(tang)基(ji)和葡(pu)萄糖(tang)基(ji)殘(can)基(ji)的特異(yi)性(xing)相互(hu)作用(yong)。

圖(tu)3. RE@SA-Con A/SNO MN貼片的表征。a）RE@SA-Con A/SNO MN的(de)代(dai)表性(xing)明場(chang)和熒(ying)光場(chang)顯微鏡(jing)圖(tu)像(xiang)。RE@SA-Con A/SNO MN橫(heng)截(jie)面(mian)（b）和單根RE@SA-Con A/SNO MNs（c）的(de)FESEM圖(tu)像(xiang)。黃(huang)色箭頭(tou)表示MN中(zhong)封裝(zhuang)的(de)NPs。d）RE@SA-Con A/SNO MNs插(cha)入離(li)體(ti)豬(zhu)皮膚後(hou)的代(dai)表性(xing)明場(chang)和熒(ying)光場(chang)顯微鏡(jing)圖(tu)像(xiang)。e）應(ying)用(yong) RE@SA-Con A/SNO MNs後(hou)豬(zhu)皮膚的(de)組織(zhi)學(xue)切片(pian)圖(tu)像(xiang)。f）可(ke)穿(chuan)戴(dai)多功(gong)能MN貼片附著(zhe)在人(ren)的腳(jiao)或手上而(er)沒(mei)有皮膚穿(chuan)刺(ci)的演(yan)示照片。藍色虛(xu)線(xian)方塊(kuai)表示MN貼片的位置(zhi)。g）代(dai)表性(xing)FESEM圖(tu)像(xiang)顯(xian)示靶向細菌(jun)的(de) RE@SA-Con A/SNO NPs。紅色箭頭(tou)表示NPs和細菌之(zhi)間的靶(ba)向界面。h）靶(ba)向細菌(jun)的(de) RE@SA-Con A/SNO-FITC NPs的代(dai)表性(xing)熒(ying)光(guang)場(chang)顯微鏡(jing)圖(tu)像(xiang)。

隨(sui)後(hou)，進(jin)壹步(bu)評(ping)估(gu)了RE@SA-Con A/SNO MNs的(de)體(ti)外(wai)抗(kang)菌效果。結果顯示，微針貼片與S. aureus或大腸(chang)桿菌(jun)（E. coli）共孵(fu)育(yu)後，細菌細(xi)胞(bao)膜(mo)出現(xian)明顯破(po)損(sun)，有(you)效抑制(zhi)了(le)細(xi)菌(jun)生(sheng)長。SYTO-9/PI染(ran)色檢測顯(xian)示，經過RE@SA-Con A/SNO MNs處理後，S. aureus的(de)存(cun)活(huo)率(lv)低。抑菌圈測試進(jin)壹步(bu)驗證(zheng)，RE@SA-Con A/SNO MNs形成(cheng)的(de)抑(yi)菌(jun)圈直徑(jing)最(zui)大，為(wei)16.57±0.42 mm。最後，評(ping)估(gu)了微針貼片在體(ti)外(wai)清(qing)除生(sheng)物膜(mo)的效果。與抗(kang)菌實(shi)驗結(jie)果壹致(zhi)，RE@SA-Con A/SNO MNs對(dui)生物膜(mo)的清(qing)除效果最為(wei)顯著，生(sheng)物膜(mo)清除率(lv)高(gao)達(da)78.13 ± 1.48%。這壹優異(yi)性(xing)能(neng)歸(gui)因於(yu)Reuterin和NO分子(zi)的(de)協同抗(kang)菌(jun)作用(yong)。

圖(tu)4. RE@SA-Con A/SNO MNs的(de)體(ti)外(wai)抗(kang)菌作用(yong)。a）RE@SA-Con A/SNO MNs處(chu)理後S. aureus的(de)代(dai)表性(xing)FESEM顯(xian)微鏡(jing)圖(tu)像(xiang)。b）與(yu)不(bu)同MN孵(fu)育(yu)24小(xiao)時(shi)後S. aureus的生長的LB瓊脂(zhi)平板(ban)的代(dai)表性(xing)圖(tu)像(xiang)。c）應(ying)用(yong)不(bu)同微針24小(xiao)時(shi)後對S. aureus的抑(yi)制圈的(de)代(dai)表性(xing)圖(tu)像(xiang)。黑(hei)色虛(xu)線(xian)方塊(kuai)表示MN貼片的應(ying)用(yong)位置(zhi)，紅(hong)色虛(xu)線(xian)圓(yuan)圈表示抑制圈。d）與(yu)不(bu)同MN孵(fu)育(yu)24 小(xiao)時(shi)後S. aureus的活(huo)/死測定。e）不(bu)同處(chu)理的S. aureus共(gong)聚(ju)焦激(ji)光掃(sao)描顯微鏡(jing)圖(tu)像(xiang)。綠(lv)色：活(huo)細(xi)菌。f）微針貼片對S. aureus的抑(yi)制(zhi)圈直徑(jing)。g）S. aureus在接(jie)受不(bu)同處(chu)理24小(xiao)時(shi)後在LB液體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)的OD600值。h）細菌死亡(wang)率(lv)分析(xi)。i）S. aureus在不(bu)同處(chu)理後的(de)生(sheng)物膜(mo)清除率(lv)。每個(ge)點代(dai)表SD±平均值（n = 3）。P < 0.001。

緊接(jie)著(zhe)驗證(zheng)RE@SA-Con A/SNO MNs的體(ti)外(wai)抗(kang)炎(yan)效果，通(tong)過流(liu)式(shi)細胞術(shu)檢測RAW264.7細(xi)胞(bao)中(zhong)CD86的相對表達(da)量，結(jie)果顯示RE@SA-Con A/SNO微針顯著降(jiang)低了(le)CD86的表達(da)水平(ping)（從12.49 ± 0.11%降至(zhi)3.17 ± 0.15%），證(zheng)明其具(ju)有(you)明顯的(de)抗(kang)炎(yan)效果。實時(shi)熒光(guang)定量PCR（RT-qPCR）和(he)免疫(yi)熒(ying)光檢測與(yu)炎(yan)癥相關的細(xi)胞因子(zi)白細(xi)胞介(jie)素(su)-6（IL-6）和腫瘤(liu)壞死因子(zi)-α（TNF-α）的(de)表達(da)水平(ping)。結果表明，RE@SA-Con A/SNO微針顯著降(jiang)低了(le)RAW264.7細胞中(zhong)IL-6和TNF-α的(de)表達(da)量，進(jin)壹步(bu)證(zheng)實了(le)其(qi)優異(yi)的(de)抗(kang)炎(yan)作用(yong)。

圖(tu)5. RE@SA-Con A/SNO MNs在體(ti)外(wai)的(de)抗炎(yan)作用(yong)。a）通(tong)過流(liu)式(shi)細胞術(shu)分析(xi)具有(you)不(bu)同MN的(de)RAW264.7細(xi)胞的(de)細胞內CD86熒(ying)光強度。b）不(bu)同組CD86的流(liu)式(shi)細胞術(shu)直方圖(tu)。c）不(bu)同組的CD86相對表達(da)量。不(bu)同處(chu)理後RT-qPCR測定RAW 264.7細(xi)胞(bao)中(zhong)IL-6 （d）和TNF-α （e）的(de)表達(da)水平(ping)。f，g）不同處(chu)理後通(tong)過免疫(yi)熒(ying)光技術(shu)測定RAW 264.7細(xi)胞(bao)中(zhong)IL-6的表達(da)水平(ping)。每個(ge)點代(dai)表 SD ±平均值（n = 3）。**P < 0.01，***P < 0.001。

接(jie)下來(lai)，評估(gu)RE@SA-Con A/SNO微針的生物安全(quan)性(xing)，將(jiang)人(ren)臍(qi)靜(jing)脈(mai)內皮細(xi)胞(bao)（HUVEC）和NIH-3T3細(xi)胞分別與不同濃(nong)度的(de)RE@SA-Con A/SNO納(na)米顆(ke)粒共孵(fu)育(yu)24小(xiao)時(shi)。結果顯示，即使在100 µg/mL的(de)高(gao)濃(nong)度下，細(xi)胞存(cun)活(huo)率(lv)仍(reng)保持(chi)在95%以(yi)上。進(jin)壹步(bu)將(jiang)HUVEC和(he)NIH-3T3細(xi)胞與不(bu)同組別的(de)微針貼片共孵(fu)育(yu)24小(xiao)時(shi)，細胞的活(huo)死染(ran)色實驗結(jie)果顯示細胞仍(reng)具有(you)較高(gao)的(de)存(cun)活(huo)率(lv)且未出(chu)現(xian)明顯雕亡(wang)（存(cun)活(huo)率(lv)>90%），這表明微針貼片具有良(liang)好(hao)的(de)生物安全(quan)性(xing)。

細(xi)胞(bao)遷移和(he)血(xue)管(guan)生成(cheng)在創(chuang)傷(shang)愈合中(zhong)具有(you)重(zhong)要(yao)作(zuo)用(yong)。通(tong)過細胞劃痕(hen)實驗和(he)血(xue)管(guan)生成(cheng)實(shi)驗表明RE@SA-Con A/SNO MNs可以(yi)顯著增(zeng)加(jia)細(xi)胞遷移，並(bing)有(you)效促進(jin)了管(guan)狀(zhuang)結(jie)構的形成(cheng)及血(xue)管(guan)生成(cheng)。RE@SA-Con A/SNO微針促進(jin)細胞(bao)遷移和(he)血(xue)管(guan)生成(cheng)的(de)機(ji)制(zhi)與(yu)其持(chi)續釋(shi)放NO有(you)關。NO通(tong)過上調血(xue)管(guan)內皮細(xi)胞(bao)上的(de)αvβ3整(zheng)合素(su)（αvβ3 integrin）發揮(hui)作用(yong)，而(er)該(gai)整(zheng)合素(su)是內皮細(xi)胞(bao)生存(cun)、遷移及血(xue)管(guan)生成(cheng)的(de)重(zhong)要(yao)黏(nian)附分子(zi)。綜(zong)上(shang)所(suo)述(shu)，RE@SA-Con A/SNO微針在促(cu)進(jin)細胞(bao)遷移和(he)血(xue)管(guan)生成(cheng)方面表現(xian)出(chu)優異(yi)性(xing)能(neng)，有(you)望(wang)加(jia)速創(chuang)傷(shang)愈合進(jin)程(cheng)。

圖(tu)6. RE@SA-Con A/SNO MNs的(de)細(xi)胞(bao)毒(du)性(xing)和(he)促(cu)進(jin)細胞(bao)遷移和(he)血(xue)管(guan)生成(cheng)。a）用(yong)不(bu)同MNs處(chu)理後HUVEC細(xi)胞(bao)的活(huo)/死測定。b）不(bu)同MNs處(chu)理後HUVEC細(xi)胞(bao)的細(xi)胞(bao)活(huo)力分析(xi)。c）不同組處理的HUVECs遷移的(de)代(dai)表性(xing)圖(tu)像(xiang)。d）不(bu)同組處理的HUVEC細(xi)胞(bao)的遷移率(lv)。e）不(bu)同組處理的HUVEC微管形成(cheng)的(de)代(dai)表性(xing)圖(tu)像(xiang)。f）HUVEC微管形成(cheng)的(de)定量分析(xi)。每個(ge)點代(dai)表 SD ±平均值（n = 3）。***P < 0.001。

然(ran)後(hou)，研(yan)究(jiu)團隊在小(xiao)鼠身(shen)上(shang)建(jian)立(li)全層(ceng)皮膚傷(shang)口模(mo)型，並接(jie)種(zhong)了慢(man)性(xing)傷(shang)口中(zhong)最常(chang)見(jian)的(de)致(zhi)病(bing)菌S. aureus，將各(ge)組MNs貼片施用(yong)於(yu)傷口處。與(yu)其(qi)他(ta)組相比， RE@SA-Con A/SNO微針有效且持(chi)續地消除了(le)傷(shang)口處的(de)S. aureus，並(bing)加(jia)速體(ti)內傷(shang)口愈合過(guo)程(cheng)。此(ci)外(wai)，在傷(shang)口愈合過(guo)程(cheng)中(zhong)，持(chi)續監(jian)測小(xiao)鼠體(ti)重(zhong)變(bian)化(hua)，結(jie)果顯示無顯著變(bian)化(hua)，這(zhe)也表明微針貼片具有良(liang)好(hao)的(de)生物相容(rong)性(xing)。

圖(tu)7. RE@SA-Con A/SNO MNs在體(ti)內的(de)應(ying)用(yong)。a）體(ti)內實(shi)驗的(de)時間方案。b）接(jie)受不(bu)同治療(liao)後(hou)第(di) 0 、3 、5 、7和(he)9天(tian)的(de)小(xiao)鼠皮膚傷(shang)口的代(dai)表性(xing)照(zhao)片(pian)。黑(hei)色虛(xu)線(xian)圓(yuan)圈表示原始(shi)傷口區域（直徑(jing)：1厘(li)米）。c）9天(tian)內不(bu)同組傷口形態(tai)變(bian)化(hua)示意(yi)圖(tu)。d）9天(tian)內不(bu)同處(chu)理的小(xiao)鼠皮膚傷(shang)口的傷(shang)口面積(ji)比(bi)值-時間曲(qu)線(xian)。e）小(xiao)鼠在接(jie)受不(bu)同治療(liao)後(hou)9天(tian)內的(de)體(ti)重(zhong)變(bian)化(hua)。每個(ge)點代(dai)表SD ±平均值（n = 7）。

最後，對小(xiao)鼠傷(shang)口處皮膚進(jin)行病理學(xue)切片(pian)染(ran)色，H&E、Masson、IL-6、CD31染(ran)色表明，RE@SA-Con A/SNO MNs貼片具有良(liang)好(hao)的(de)促進(jin)傷口愈合、減(jian)少(shao)炎(yan)癥反(fan)應(ying)、促進(jin)血(xue)管(guan)生成(cheng)的(de)作(zuo)用(yong)，進(jin)壹步(bu)證(zheng)明了RE@SA-Con A/SNO微針在促(cu)進(jin)體(ti)內傷(shang)口愈合方面的(de)優異(yi)能(neng)力。

圖(tu)8. 體(ti)內RE@SA-Con A/SNO MNs應(ying)用(yong)後(hou)組織(zhi)再生(sheng)、炎(yan)癥反(fan)應(ying)和血(xue)管(guan)生成(cheng)的(de)研(yan)究(jiu)。第(di)9天(tian)接(jie)受不(bu)同處(chu)理後a）H&E染(ran)色、c）Masson染(ran)色和e）IL-6免疫(yi)組化(hua)染(ran)色的代(dai)表性(xing)明場(chang)顯微鏡(jing)圖(tu)像(xiang)。b）第(di)9天(tian)不(bu)同組的表皮厚(hou)度定量分析(xi)。d）第(di)9天(tian)不(bu)同組的膠(jiao)原蛋(dan)白體(ti)積(ji)分數(shu)（CVF） 定量分析(xi)。f）第(di)9天(tian)不(bu)同組的IL-6陽(yang)性(xing)細(xi)胞(bao)定量分析(xi)。g）第(di)9天(tian)不(bu)同處(chu)理後用(yong)CD31（紅(hong)色）和DAPI（藍色）染(ran)色後傷(shang)口組織(zhi)新生(sheng)血(xue)管(guan)形成(cheng)的(de)免疫(yi)熒(ying)光圖(tu)像(xiang)。h）第(di)9天(tian)不(bu)同組的CD31陽(yang)性(xing)細(xi)胞(bao)定量分析(xi)。每個(ge)點代(dai)表SD ±平均值（n = 7）。**P < 0.01，***P < 0.001。

結論：該(gai)研(yan)究(jiu)設計了(le)壹種(zhong)裝(zhuang)有(you)工程(cheng)化(hua)NO釋(shi)放納(na)米載體(ti) （RE@SA-Con A/SNO NPs）的(de)新型(xing)多(duo)功(gong)能微針貼片。納米載體(ti)由海藻(zao)酸(suan)鈉聚(ju)合(he)物制成(cheng)，該(gai)聚合物封裝(zhuang)了(le)抗菌(jun)劑羅氏菌(jun)素(su)（Reuterin），並修飾有Con A和NO分子(zi)。Con A使(shi)NPs通(tong)過特異(yi)性(xing)識(shi)別(bie)細(xi)菌表面的(de)多糖(tang)來靶向有害細(xi)菌(jun)，然(ran)後(hou)釋(shi)放抗(kang)菌劑60 h，賦(fu)予(yu)NPs靶(ba)向能力，具有(you)高(gao)效的抗(kang)菌(jun)效果。同時(shi)，NPs能(neng)夠持(chi)續釋(shi)放NO，表現(xian)出(chu)抗(kang)炎(yan)活(huo)性(xing)並(bing)促(cu)進(jin)組織(zhi)再生(sheng)，從而(er)進(jin)壹步(bu)促(cu)進(jin)慢性(xing)傷(shang)口閉(bi)合(he)。在S. aureus感(gan)染(ran)的(de)慢性(xing)傷(shang)口小(xiao)鼠模(mo)型中(zhong)，在MNs的(de)幫(bang)助(zhu)下，NPs直接(jie)穿(chuan)透(tou)細菌生物膜(mo)並高(gao)效遞送(song)至(zhi)感(gan)染(ran)的(de)傷口組織(zhi)，表現(xian)出(chu)優異(yi)的(de)消除有(you)害細(xi)菌(jun)和(he)加(jia)速慢性(xing)傷(shang)口愈合的(de)能(neng)力。